10 tips för perfekt pipettering

Som en nybörjare i ett forskningslabb, var det allra första projektet jag fick att pipettera inkrementella mikro-volymer H2O på en bit parafilm.

Trist!

Vägning utav vätskan på parafilm och mäta vikt mellan 10 replikat för var mikro-volym fortsatte en vecka innan jag rörde något annat i dett labb!

Lyckligtvis hjälpte brist på finansiering mig att sluta på detta labbet och till fler andra spännande projekt under åren.

Däremot har vikten av att ha en bäst princip för pipettering som jag tränade.

Pipetten är att ett instrument i labbet som kan ge olika resultat baserade på den person som nyttjar den.

Detta är i synnerhet sant när man kör kvantifiering experiment.

Kolven släpps för snabbt, ej förvätning utav en ny spets och inte doppa spetsen nog långt är mycket standard när man jobbar för fort i labbet.

Sådana blunder kan leda till skillnader i volym mellan prover, som resulterar i skeva analysresultat.

Här är 10 förslag som kan komma till hands när man utbildar människor i labbet.

Använd rätt pipettspets

– Det är enkelt att anföra!

Använd rätt topp med rätt pipett.
Alternativa varumärken är godtagbara om de innehar testats utav säljf företaget för att arbeta med ditt pipett trade mark.

Förväta pipettspetsen
– Förevätning ökar fuktigheten därinnanför spetsen, som minskar förångning.

Undersök spetsen före dispensering av provet
– När man sänker spetsen för långt ned i vätskan, är det mestadels tillägg droppar som fastnar på utsidan utav spetsen (till exempel vid pipettering av enzymer).

Se till att du torka av utsidan mjukt före dispensering.

Se till att ej vidröra spetsöppningen för att avstyra att suga bort en andel av önskad volym!

Använd standardläge pipettering
– Kom ihåg att använda det övriga stoppet på pipetten för att mäta upp hela volymen.

Paus konsekvent efter att aspiration
– Efter ha tappat upp vätska, gör det till en bruk att stanna före man drar ut spetsen totalt.

Vätskan fortfar att strömma in i spetsen även efter att kolven stannat.

Dra pipetten rakt ut
– Sidorna på behållaren som vätskan sugs alstrar uppsugning och avbräck av volym

Använd konsekvent kolv tryck och fart – “Det handlar om puls – repeterbara åtgärder ger repeterbara resultat”!

Sänk spetsen till korrekt djup
– Enorm volym pipetter (1-5 ml) ska vara nedsänkt 5-6 mm under menisken.
Mindre volymer pipetter skall nedsänkas 2-3 mm under menisken.
För mycket nedsänkning kommer att orsaka fluid att hålla sej till utsidan utav spetsen, och alltför liten nedsänkning kommer att leda till luftbubblor.

Minimera hanteringen av pipetten samt längst upp
– Värmen överförs från händerna till pipetten och / alternativt längst upp, detta kan påverka leveransvolymer.

Arbeta på temperaturjämvikt
– Jobba på en konstant värme minimerar variationer i pipetterade volymer.

Detta är lite knepigt eftersom flera reagenser kräver lagring på is, medans processen för pipettering sker vid rumsvärme!
Om förfarandet ej medger temperaturjämvikt, då är det mer viktiga tips som du borde lära dej.